標(biāo)準(zhǔn)菌種從菌種保藏中心購買的原始菌種管是玻璃安瓿裝的凍干菌,接收同時應(yīng)檢查是否有隨菌種附有的相關(guān)資料。接收菌種時應(yīng)檢查安瓿的數(shù)量和名稱,和每一支安瓿的完整性。在相應(yīng)的菌種接收記錄上記上所有的關(guān)于菌種的信息,如名稱、數(shù)量和接收日期等。在菌種安瓿及菌種管上粘貼標(biāo)簽,內(nèi)容包括:菌種名稱、菌種代號、代次、接收日期、接收人、貯存條件、有效期至。新購入的0代原始菌種儲存于-20℃,有效期為三年。從上級藥檢部門購買的已接種好的菌種斜面(3代)應(yīng)檢查菌種管是否完好。儲存于2~8℃,有效期為3個月。
標(biāo)準(zhǔn)菌種的制作方法:
1.打開潔凈工作臺。
2.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并讓其自然風(fēng)干。
3.用一小砂輪在安瓿的上部劃一條線,用手輕輕將安瓿掰開(開啟安瓿時必須小心,因?yàn)榘碴秤鰺釙r可能會破裂)。
4.以無菌方法用一無菌吸管從已準(zhǔn)備好的上述液體培養(yǎng)基中移取0.5~0.8ml到安瓿中。
5.輕輕地旋轉(zhuǎn)安瓿以使凍干菌種和液體培養(yǎng)基充分混合并*溶解。
6.用無菌吸管將安瓿內(nèi)菌液全部轉(zhuǎn)接到相應(yīng)的液體培養(yǎng)基。
7.根據(jù)安瓿上所標(biāo)明的不同菌種類型而將其培養(yǎng)于相應(yīng)的溫度(細(xì)菌培養(yǎng)溫度30~35℃,培養(yǎng)18~24小時;真菌培養(yǎng)溫度23~28℃,培養(yǎng)3~5天。觀察是否渾濁,渾濁說明菌種復(fù)蘇生長;若不渾濁,細(xì)菌應(yīng)延長培養(yǎng)時間至7天,真菌應(yīng)延長培養(yǎng)時間至14天,若仍未渾濁,滅菌處理。
8.黑曲霉的菌懸液先室溫待菌懸液融化后用無菌吸管吸取管內(nèi)液體1~2滴滴在改良馬丁瓊脂斜面上,用吸管涂布均勻,置23~28℃培養(yǎng)5~7天,斜面正面為黑褐色厚絨狀,色澤均一,不應(yīng)有雜色,斜面?zhèn)让鏌o色,接近菌層培養(yǎng)基略帶黃色。確認(rèn)后用含有0.05%(ml/ml)的吐溫-80的0.9%無菌氯化鈉溶液洗脫到無菌試管中。
9.標(biāo)準(zhǔn)菌種取經(jīng)復(fù)蘇后的上述細(xì)菌菌液8-10ml至液體培養(yǎng)基中按g項(xiàng)操作對菌種進(jìn)行復(fù)壯。以無菌技術(shù)向復(fù)壯后的菌種中加入100ml20%的無菌甘油混勻,1-2ml/管分裝于凍存管。每個菌種制備10支,按順序進(jìn)行編號,一支做為質(zhì)控管進(jìn)行質(zhì)量控制,即進(jìn)行相應(yīng)的確認(rèn)。其余作為儲備管。黑曲霉的h項(xiàng)下洗脫液按h項(xiàng)下方法進(jìn)行復(fù)壯,制成復(fù)壯后的孢子懸液20ml。以無菌技術(shù)向復(fù)壯后的菌種中加入20ml、30%的無菌甘油混勻,1-2ml/管封存于凍存管。制備10支,按順序進(jìn)行編號,一支做為質(zhì)控管進(jìn)行質(zhì)量控制,即進(jìn)行相應(yīng)的確認(rèn)。其余作為儲備管。將上述制備好的凍存管逐支粘貼標(biāo)簽。內(nèi)容包括:菌種名稱、菌種代號、編號、代次、制備日期、制備人、貯存條件、有效期至等。